Cubensis Mexican: Агар/Пшено/Пшеница/Парник.

[Hatarakimas]

 Здравствуйте дорогие грибники и не только . Изначально не было цели записывать репорт , но как это зачастую бывает , случается.. Случилось ! Прошлогодний принт после года в холодильнике обсеменился  тем кого не ждали . Но эти гости не спрашивают, пришли и все. В обоих банках после инокуляции выросла чужеродная жизнь . Было принято решение искать шприц со взвесью в мусорке ,закачивать туда еще 5 кубиков воды   и делать посев на питательную среду .   

      Так как чашек петри у меня  считай нет (1 штука) подготовил баночки из под консервов в количестве 6 штук. 

1) стерилизация банок

 

2) подготовка и обеззараживание рабочего места , обработка ультрафиолетом , моем стены и пол  жавель солидом , опрыскиваем бокс и стенки спиртосодержащей жидкостью

 

3) приготовление питательной среды 

применялся следующий рецепт . Картофельно-глюкозный агар: 200 г очищенного и нарезанного картофеля кипятят в 500 мл воды не менее 2 часов, расплавляют 17 г агар-агара в 500 мл воды, отвар картофеля процеживают в агар и добавляют 20 г глюкозы

4) стерилизация готового продукта

5) Охлаждение агра до 60 градусов и фасовка по банкам

6) внесение микробиологической петлей  не стерильной споровой взвеси, на питательную среду

7) Ожидание .

Примечания . На дне SABа под металлической решеткой лежит промоченная в жавель-солиде ткань , для поглощение контаминантов. Настоятельно не рекомендую использовать что либо другое вместо чашек петри . Очень неудобно .Делал это только из за необходимости и нашествия коронавируса (да , в крышках  сделал отверстия сверлом и заклеил их омнипором). Во вторник  должен купить настоящие чашки петри , в них я уже буду рассаживать и изолировать тот мицелий который мне понравиться. SAB у меня сооружен из аквариума и на скотч приделана крышка. Столкнулся с проблемой .Когда разливал агар внутри бокса, естественно стекло потело и я не видел сколько наливал , приходилось протирать ватным диском смотровое стекло .  Посев был произведен методом штрихов . Самодельная петля прошла испытания , в целом доволен , но возможно проволоку нужно было большего сечения чтоб удобнее было наносить споровую взвесь 

Порядок нанесения споровой взвеси : 

1) Накаливание петли , погружение в агар . Капаем из шприца на петлю наносим штрихи

2) Накаливаем петлю поворачиваем банку (чашку)на 90 градусов наносим штрихи (штрихи естественно должны пересекаться с предыдущими)

3) Повторяем , пока не останется  последний сектор , его одной линией распределяем по середине ( внимательно следите чтоб этот штрих не касался предыдущих  1.2.3) 

По предложенному рецепту агара , субстрат получился идеальным . Картоха сначала закипела , потом я перевел на слабый огонь , иначе наш супчик картофельный весь испариться за 2 часа . Я делал половинчатую порцию, но 200 г картошки оставил . Итого 10 г агар-агара  10 г  глюкозы (у меня был обычный сахар) 250 г воды .Через 2 часа  процедил картошку , картофельный отвар смешал с уже разведенным в воде агар-агаром и сахаром, закинул на стерилизацию на 60 минут. Картошку закинул желудок  

     Отдельное спасибо господину  WarFlop(у) за терпение и ответы на мои нубские вопросы. 

Изменено 24 июля 2020 пользователем Hatarakimas

[Hatarakimas]

14 апреля 3-4 дня спустя .Появились первые результаты , в банках заметны очаги мицелия(камера неспособна показать результат через 2 стекла ,хотя если приглядеться в  единственной чашке петри видно одну точку) , в одной из консервов вырос зоопарк по виду тот же самый который сгубил зерно . Зараженную банку  сфотал и выбросил с яростью на улицу 

 Банки и петри стоят в SABе , температура там около 24- 25.  Перенес  в парник  с температурой около 28 

 

Изменено 15 апреля 2020 пользователем Hatarakimas

[Hamsabala]

@Hatarakimas на общем фото САБ-а бутылочка с черной крышкой - это спирт? в крышке отверстие?

[Hatarakimas]

1 минуту назад, Hamsabala сказал:

@Hatarakimas на общем фото САБ-а бутылочка с черной крышкой - это спирт? в крышке отверстие?

Нет, это тоже псевдо петри =) Да , в каждой крышке отверстие . Бутылка со спиртом стоит на самом САБе . 

[Hamsabala]

@Hatarakimas я про неё и спрашивал. Держи емкости со спиртом на максимально возможном расстоянии от огня, на всякий случай.

Слежу с интересом.

Изменено 14 апреля 2020 пользователем Hamsabala

[Hatarakimas]

В 14.04.2020 в 23:55, Hamsabala сказал:

@Hatarakimas я про неё и спрашивал. Держи емкости со спиртом на максимально возможном расстоянии от огня, на всякий случай.

Слежу с интересом.

Этот коктейль не сильно полыхает тем более что это не совсем спирт 50% изопропила 20% этила остальное вспомогательные вещества. Единственно когда делал чистую работу случайно прыснул себе эту штуку на маску))) Думал в этой каморке и останусь 

       Время экспериментов.  Сунул в псевдо петри  немного обросшего зерна из зараженных банок ( сохранил в холодильнике на всякий случай срок 2 недели)  . Посмотрим что будет .

Изменено 18 апреля 2020 пользователем Hatarakimas

[Hatarakimas]

Этап второй . Перенос мицелия . После  недели ожидания получились следующие результаты . из 7 банок/чашек в трёх  обнаружено то что что надо . В единственной петри вырос  грибной грааль - ризоморфный мицелий , но в чашке у него были конкуренты  шла война , десант попросил срочную эвакуацию . Итого:  был перенесен в 5 чашек ризоморфный мицелий , еще в две подсажен обычный мицелий 

Особенности : В этот раз агар заварен на 70% силы вместо 10 гр сахара поместил 7 . Когда варил картофель,  кинул туда щепотку кофе . По моему мнению такие манипуляции возможно  могут ускорить рост/активность. Температура в парнике около 27 .  Чашки с донорами оставил в боксе . 

 

Продолжение следует. 

Изменено 18 апреля 2020 пользователем Hatarakimas

[Hamsabala]

13 минуты назад, Hatarakimas сказал:

В этот раз агар заварен на 70% силы вместо 10 гр сахара поместил 7

10 грамм сахара на какой объем воды?

[Hatarakimas]

1 минуту назад, Hamsabala сказал:

10 грамм сахара на какой объем воды?

на 250 г воды + картофельный отвар  500 г.  но он почти полностью выкипает и остаться ну грамм 100   даже при тщательном выжимании . Хотел изначально сделать всего половины 100 г картофеля и 250 воды . Картошка выкипела потом благополучно потушилась и пожарилась .Завел опять но уже сделал 200 гр картохи и 500 воды. еще доливал грамм 100  на втором часу варки .Возможно нужно меньше температуру , хотя и так на тройке варил (камфорка) 

[Hamsabala]

@Hatarakimas 10 грамм фруктозы/дестрозы/сахара обычно кладут на 1 литр воды...

[Hatarakimas]

я пользовался этими рецептами 

Войдите или зарегистрируйтесь для просмотра содержимого. Купить семена конопли.

 

Как можно увидеть сыпят 20 г глюкозы на литр жидкости 

Изменено 18 апреля 2020 пользователем Hatarakimas

[Imr1m]

В 12.04.2020 в 00:00, Hatarakimas сказал:

 2) подготовка и обеззараживание рабочего места , обработка ультрафиолетом , моем стены и пол  жавель солидом , опрыскиваем бокс и стенки спиртосодержащей жидкостью

Войдите или зарегистрируйтесь для просмотра содержимого. Купить семена конопли.

 

Бро, лампа какого номинала мощности и на какое время включаешь?

У меня ДРЛ 125 есть, тоже думаю бюджетненький УФ получить, подключать только через лампу накаливания собираюсь за неимением балласта.

[Hatarakimas]

9 часов назад, Imr1m сказал:

Бро, лампа какого номинала мощности и на какое время включаешь?

У меня ДРЛ 125 есть, тоже думаю бюджетненький УФ получить, подключать только через лампу накаливания собираюсь за неимением балласта.

250  да минут на 40-50 . Думаю все дохнут, проблем не было с заражениями.  В помещении ощущается запах озона. Ну в будущем на алике купи баласт да и все. У меня раритетный совковый 

[Imr1m]

1 час назад, Hatarakimas сказал:

250  да минут на 40-50 . Думаю все дохнут, проблем не было с заражениями.  В помещении ощущается запах озона. Ну в будущем на алике купи баласт да и все. У меня раритетный совковый 

Поклон.

Всех благ от А до Я, ризоморфа и ровного микроклимата.)

[heinz1991]

@Hatarakimas бро, а если вместо сахара сделать питательную среду на меду? Тут произошёл интересный случай: сделал два баяна для оживления спор, один на 5% глюкозе, а другой на 10% растворе мёда и оставил их дней на 8-10. Так вот в том баяне, где мёд, появилась жизнь!:) А в глюкозе всё было тихо-мирно.

[Hatarakimas]

22 минуты назад, heinz1991 сказал:

@Hatarakimas бро, а если вместо сахара сделать питательную среду на меду? Тут произошёл интересный случай: сделал два баяна для оживления спор, один на 5% глюкозе, а другой на 10% растворе мёда и оставил их дней на 8-10. Так вот в том баяне, где мёд, появилась жизнь!:) А в глюкозе всё было тихо-мирно.

Питательную среду можно почти из чего угодно сделать, изначально хотел на светлом солодовом экстракте сделать (считается эталонным), но нужный магаз далеко и на карантине. Читал много положительного про мед . Возможно при инокуляции сделаю жм 

[Hatarakimas]

 

Рестарт , бактериальное заражение . Рассадил мицелий с материнских чашек на 10 позиций . По совету хорошего человека hamsabala добавил сахара,  в этот раз меда в два раза меньше (5г). Добавил молотого зерна (будущего питательного субстрата ) при варки картофеля. 

Возможно антисептические свойства меда (хотя после стерилизации они наверное все исчезли) как то повлияют на процесс

все это выглядело примерно так:   Кто хоть раз в чашках выращивал стразу понял о чем я, появился склизкий налёт тормозящий рост мицелия. 

[Hamsabala]

6 минут назад, Hatarakimas сказал:

Рестарт , бактериальное заражение 

Как ты это определил?

У тебя появились очаги роста бактерий?

 

Склизкий налет у меня ни разу не появлялся...

У тебя конденсат в чашках был? Может это капли конденсата на поверхности агара образовали лужу?

[Hatarakimas]

1 минуту назад, Hamsabala сказал:

Как ты это определил?

У тебя появились очаги роста бактерий?

 

Склизкий налет у меня ни разу не появлялся...

У тебя конденсат в чашках был? Может это капли конденсата на поверхности агара образовали лужу?

 видно их рост это точно они и запах неприятный , сначала покрывают агар пленкой матовой , а потом если пальцем ткнуть в него чем то похоже на жир /крем , и поверхность вся такая. Чудом уцелевшие участки агара имели прозрачный цвет без налёта. У  меня было плохое предчувствие еще при пересадке с материнской чашки , потому что бактерии эти были занесены от туда. Надеялся что из 5 в одну то не попадут . Возможно большое кол-во сахара сыграло свою роль , в любом случае в этот раз использую другие образцы, ризоморфного мицелия больше не осталось.

[Hamsabala]

3 минуты назад, Hatarakimas сказал:

У  меня было плохое предчувствие еще при пересадке с материнской чашки , потому что бактерии эти были занесены от туда.

Практика спасения мицелия от бактерий тоже нужна. Все на пользу

[Grossvater]

@Hatarakimas бро, читал у Стамеца как выделить с заражённой среды здоровый мицелий. Нужно заражённый агар поместить между а двумя слоями агара (сэндвич) сделанного с добавлением антибиотика. После того, как мицелий через него прорастет - пересадить на чистую среду.

[Hatarakimas]

я

В 23.04.2020 в 13:08, Grossvater сказал:

@Hatarakimas бро, читал у Стамеца как выделить с заражённой среды здоровый мицелий. Нужно заражённый агар поместить между а двумя слоями агара (сэндвич) сделанного с добавлением антибиотика. После того, как мицелий через него прорастет - пересадить на чистую среду.

В следующий раз обязательно попробую, если такая ситуация случиться 

[Grossvater]

@Hatarakimas но это сработает только если бактериальное заражение. От грибных контаминантов этот способ не канает.

[Hatarakimas]

13 часа назад, Grossvater сказал:

@Hatarakimas но это сработает только если бактериальное заражение. От грибных контаминантов этот способ не канает.

да с ними и проще. Яж репорт таки начал вести по причине не стерильной споровой взвеси. От плесени я избавился еще в первой пересадке .. Ну или мне повезло и агрессивной плесени не нашлось , которая захватывает пространство менее чем за сутки.

[Hamsabala]

@Hatarakimas как последняя пересадка?