Tapalpa \ пшеница \ овес \ агар

[phin]

Шалом , друзья! 

Небольшое предисловие : от добрых людей был получен  принт Tapalpa , из которого была приготовлена споровая взвесь. 5 шприцев - 2 с гентамицином, 3 без . Логика была обусловлена тем, что хранение взвеси с антибиотиками имеет множество противоречивых мнений, так что разберемся по ходу и заодно протестим подумал я.

 

Далее по порядку:

• посевной материал - пшеница, овес . На первую партию (4 банки 0.5л) взял по 0.5л сухого зерна ;
• зерно замочено на сутки, с левомицетином из расчета 0.5 таблетки на банку, к слову тут я допустил ошибку и не промыл зерно через 12 часов, овес начал немного бродить;
• после замачивания отправил варится на 10-15 мин;
• готовое зерно рассыпал по банкам с вермикулитом на дне;
• банки обычные с крышками твист офф (откручиваются руками), в крышках отверстия, заклеенные пластырем, сверху обернул фольгой;
• отправил банки на стерилизацию, в скороварку влазит в аккурат 4 банки по 0.5л;
• стерилизовал дробно, 2 раза по часу с лишним,  с перерывом в сутки;
• после того как банки остыли, была произведена инокуляция, (споры были без регидратации, из принта практически сразу в банки) и дальнейший переезд в теплое сухое место;
• банки были освоены уверенно, к сожалению не только мицелием, на 2х была зеленая плесень, на 1й черная;
• из 4х в итоге выжила 1 банка;

 

Фото чемпиона

 

Тем не менее, из одной зараженной банки, пока очаг был достаточна мал, был взят забор обросшего зерна в чашки петри на агаровую среду. К слову с чашками такая история была -  заказывал одноразовые пэт чашки, и либо мискликнул на сайте, либо в магазине перепутали  , вобщем прислали 1 пачку нормальных 90мм и 2 пачки 60мм (маленькие), деваться было некуда, подумал что на маленьких тоже можно потренироваться:

 

• агар был приготовлен из 1 литра дистиллированной воды, в которой было отварено ~200гр картофеля и 20 гр 900го агара ;
• пока разливал агар по чашкам, образовалось немало конденсата,  решается хранением чашек в перевернутом виде;
• зерно было перенесено пинцетом из банки в SABе на агар в чашки;

 

Чашки обросли достаточно быстро

 

 

 

1 чашка 'заболела'  на первом фото, на втором для сравнения здоровая, видно что агар прозрачный ничего постороннего на первый взгляд нет:

 

 

 

Из обросших чашек, сделал забор мицелия в свежие чашки - попробовать выделить чистую  культуру .

 

Агар сделал на воде, которая осталась после приготовления пшеницы - 1 к 4 с дистилированной водой , 20 гр на литр 1200 агара , краситель фуксия. Стерилизовал в удобной как мне казалось медицинской бутылке 400 мл, в скороварку она не помещается в полный рост, пришлось ее класть на бок, конечно в процессе весь агар вылился  - пришлось переделывать .

 

Удобство бутылки - в узком горлышке , которое разливает по чашкам почти без потерь . Пока разливал агар, понял что нужен бокс побольше после перевернутой стопки из 3х маленьких чашек петри с агаром

 

 

 

После того как мицелий был перенесен из одних чашек в другие, я сделал то, с чего следовало начать гров : заразил свежие чашки спорами . Петли перед забором спор не макал в агар, т.к принт на бумаге -  стремно было испачкать его и испортить, просто поелозил по принту и по аналогии с агаром. Петли использовал одноразовые из пластика (верхний ряд чашек  с мицелием, нижний со спорами):

 

 

Пока обрастали банки из первой партии, в шприцах проросли споры, уверенности в успехе прибавилось и была заражена новая партия из 4х банок. Алгоритм тот же, из изменений - сменил крышки на фольгу в 4 слоя и микропористый пластырь 3M , которым заклеил отверстия для инокуляции в 2 слоя. В этот раз тоже пересушил пшеницу, не смотря на то что не сушил на полотенце , решил проблему добавлением 10 мл воды.

 

Процесс

 

 

Тем временем в шприцах выросли медузы, думаю пересадить на жидкую среду. Пока живут в холодильнике.

 

 

Общий план

 

 

 

Продолжение следует, всем добра

 

 

 

 

Изменено 22 июня 2020 пользователем phin
лишние фото

[phin]

И снова здравствуйте

Спасибо, всем кто заглядывает за внимание.

 

Собственно , зашел поделиться новостями:

1.  Одна банка была переселена в кейс в связи с полной колонизацией зерна.

 

Кейс : 0.5л банка зерна + примерно 0.8л субстрата . Субстрата вероятно можно было больше , но я что -то пожадничал . Посмотрим что получится.

 

Субстрат : 65\30\5 - кокос\торфогрунт для пальмы (но это не точно) \ вермик (5 это довольно приблизительно, возможно меньше)

 

 

 

 

2. Остальные 4 банки на низком старте + 2 , которые стартанули позже:

 

 

3. Петри с агаром на пшенице как и следовало ожидать особо успехов не показывают, нужно было все таки переделать нормально агар. В процессе стерилизации в бутылку явно попало много воды + часть вытекло как следствие очень бедная питательная среда, на которой мицелий растет жиденький.

 

Фото чашек с пересаженным мицелием:

 

Фото чашек со спорами :

 

Вобщем рост вроде и есть, споры проросли, но как то все вяло.Мицелий воздушный.

 

 

Любопытно , что в чашках, из которых брал миц, он стал более пушистый\плотный (после открытия и забора материала) возможно кто то объяснит  природу этого . У самого еще руки не дошли найти инфу.

 

4. Сделал нормальный агар   :

 

Питательная среда : ~120гр картофеля, 600мл дистилированной воды, 10гр глюкозы, 8 гр 1200го агара.

Использовал оставшиеся 10 маленьких(60мм) чашек , надеюсь на этой неделе доедут нормальные, с засечками на дне, чтоб не ездили и полями для надписей. 5 чашек были засеяны спорами, другие 5 зерном\нитями, которые осталось в банке после кейсинга. Еще был засеян 1 флакон, просто из любознательности. Думаю я не одинок , в том что процесс выращивания порой захватывает больше результата.

 

 

5. Разбавлю немного гров фотками конского навоза, который сегодня попался пока были на прогулке(сперва попались кони, навоз как следствие):

 

Собственно эта спонтанная находка определила следующий стрейн для грова, благо с собой был пакет.

 

 

Всем добра)

 

To be continued...

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Изменено 30 июня 2020 пользователем phin

[Hamsabala]

Вторая фотография агара, левая чашка - несмотря на бедный агар, мицелий показывает ризоморфный рост, что говорит о его сильной жизнеспособности. Переноси те "кисточки" в новые чашки. Это будет очень хороший посадочный материал.

 

Изменено 13 июля 2020 пользователем Hamsabala

[phin]

Шалом, уважаемые друзья!

 

В связи с недолгим отъездом, вынужден был оставить хозяйство на несколько дней.

 

Итак, результаты первой закейшеной банки:

 

Газон подъела плесень , терять было особо нечего подумал я , и ампутировал кусок с плесенью.

 

Здоровый кусок был замотан в фольгу и поселен в баклажку 7.07

 

 

Импровизированный парник стоит на коврике с подогревом, за это время средняя температура было 29 С, сейчас 26-27.

Внимание вопрос знатокам -  на сегодня 13.07,  все еще нет видимых зачатков грибов , подождать еще несколько дней либо отправлять в холодильник? 

 

 

Касательно остальных банок - закейсил 4 штуки. 2 примерно 9.07 и еще 2 12.07 :

 

Первая партия и все 4 вместе

 

2 кейса перемешал зерно с субстратом + покровной слой, остальные 2 - сделал сендвич: земля-обросшее зерно-земля.

 

Осталось 2 банки, которые обрастают, одна почти обросла, вторая из за сухости двигается медленнее:

 

На более питательном агаре споры высаженные 29.06 прорастают не в пример бодрее бедной среды :

 

 

В паре чашек появилась бактериалка либо что то подобное, но это явно не миц:

 

 

Пересаженное 29.06 зерно аналогично:

 

В одной петри замечены темно-синие точки похожие на плесень (на фото видно не очень четко, но они есть):

 

[Hamsabala]

25 минут назад, phin сказал:

Пересаженное 29.06 зерно аналогично:

красивые бутылочки  и без конденсата....

 

 

25 минут назад, phin сказал:

Первая партия и все 4 вместе

Первую партию пора переводить на формирование примордий.

 

 

26 минут назад, phin сказал:

Здоровый кусок был замотан в фольгу и поселен в баклажку 7.07

Он готов начать плодоносить, но ему влажно

[phin]

@Hamsabala  спасибо, у флакона вентилируемая крышка как на фото у нижнего, конденсат не собирается

 

 

Я не стал исключением - меня настигла плесень в кейках . Плата за использование грунта , кроме кокоса. В том грунте для пальм , который добавлял - куча волокон, торф. Девушка в таком выращивает фиалки, там на поверхности у всех поголовно плесень белая.  Вобщем как я понимаю он вкусная булочка для плесени сколько не стерилизуй. Спора попадает из воздуха и благополучно прорастает. Возможно шансов было б больше дождись я  пока миц полностью покроет грунт . But who knows....  В будущем буду растить кубы в кокосе.

 

 

@Hamsabala как только уменьшил влажность показались грибы из ампутированного кейка, но там вылезла плесень , немного смочил ее перекисью, не знаю поможет ли. Читал что можно солью посыпать. Из средств есть перекись \ хлоргексидин \ соль . Есть еще конечно фундазол,  но вероятно  грибы после него кушать будет не самой лучшей идеей . На фото не оч хорошо видно, но там сине-зеленая плесень:

 

Кейк, который зарос меньше поражен визуально больше. Для меня пока не ясно - миц не пророс потому что была плесень, которую не видно, либо плесень появилась там где не успел прорости миц:

 

 

 

 

Не ясно паутинка или просто миц переувлажненный

 

 

На втором кейке визуально пока все ок, но т.к они стояли рядом - готовлюсь к худшему

 

Температура +25 , свет от настольной лампы,  на дне влажный керамзит, в целом в парнике по влажности ок, проветриваю руками 3 раза в день, пока наблюдаю. Советы по борьбе с плесенью приветствуются - просто выкинуть жалко)