Общие вопросы по выращиванию культуры на агаре.

[Hamsabala]

36 минут назад, Yolo сказал:

Я правильно понимаю, что многократная биопсия даст практически изолят?

Многократная биопсия чего?

[Yolo]

10 минут назад, Hamsabala сказал:

Многократная биопсия чего?

Биопсия гриба.

как я понял, при биопсии я захватываю порядка 500+- стрейнов из всего многообразия, который засажен в кейк. Из жм в дальнейшем зачерпываю тоже часть. Выращиваю. Делаю опять биопсию. По идее я зачерпну уже порядка 100 стрейнов?

 

я все в свою дудуку пиликаю. Агар мне видится дополнительным технологическим этапом. Я понимаю, что в агаре я могу выбрать лучший образец до посадки. Но итеративно  с жм разве я не приду практически к монокультуре?

Изменено 7 июня 2020 пользователем Yolo

[Hamsabala]

1 час назад, Yolo сказал:

Биопсия гриба.

как я понял, при биопсии я захватываю порядка 500+- стрейнов из всего многообразия, который засажен в кейк. Из жм в дальнейшем зачерпываю тоже часть. Выращиваю. Делаю опять биопсию. По идее я зачерпну уже порядка 100 стрейнов? 

У меня недостаточно знаний, чтобы дать четкий ответ. Давай рассуждать.

 

Ты выбираешь гриб, клонируешь его, сохраняешь в виде жидкого мицелия, берешь часть жидкого мицелия для инокуляции, выращиваешь похожие на выбранный гриб грибы, снова клонируешь выбранный гриб, повторяешь процесс.  Этот процесс позволит получть изолят, но это займет много больше времени, чем изолирование культуры на агаре. Потому что:

¤ приходиться растить грибы

¤ ты не имеешь возможность выделить нужный мицелий из жидкого мицелия.

 

На агаре это занимает меньше времени, потому что:

¤ не надо тратить время на выращивание.

¤ на агаре ты можешь выбирать сектора мицелия, которые хочешь продолжать растить.

[Yolo]

А есть какое-то мнение по вопросу - что наиболее наглядно? Взять самый (ризоморфный?) самый кусок мицелия с агара и его взращивать или брать биопсию самого плодовитого кейка (большой гриб - несколько тел из одной точки).

 

Просто я нацелен на периодическое взращивание поэтому пытаюсь понять, какой путь будет практичнее и проще. 

[Hamsabala]

8 минут назад, Yolo сказал:

А есть какое-то мнение по вопросу - что наиболее наглядно?

Что значит наглядно?

[Yolo]

Сам процесс выбора. Просто вытягивая из гриба в голове будет представление, что получу не хуже след грибницу (я не знаю на сколько это верно). Я как бы беру вытяжку из результата.

 

Вырезая из мицелия на агаре - насколько понятно или наглядно, что я выбираю наилучший для плодоноса стрейн. Является ли только ризоморфность и скорость роста показателями сильного плодоношения?

[tymko]

5 часов назад, Hamsabala сказал:

О! Наконец появились единомышленники.
Напишите, как вы боритесь с конденсатом в чашках.

 

Стандартно переворачиваю через какое-то время после переноса. Но конечно есть куча нюансов. Споры либо клон с гриба можно быстро переворачивать, кусок агара позже, чтоб не отвалился. Так же проблемы с переворачиванием у грибов с пушыстым мицем растущим в разные стороны для прикрепления - гериций, сморчки. Сейчас летом вообще хуже все будет и с конденсатом и с застыванием агара. Буду побольше его кидать.

[Hamsabala]

8 минут назад, tymko сказал:

Стандартно переворачиваю через какое-то время после переноса

Я так же делаю, но конденсат остается. А вот как его убрать?

[tymko]

10 часов назад, Hamsabala сказал:

Я так же делаю, но конденсат остается. А вот как его убрать?

А не знаю, он вроде не мешает, разве что смотреть иногда и фотографировать. А так заражения через него у меня не происходит.

 

Вот у меня типичный вид - конденсат на стенках и крышке. 

 

 

10 часов назад, Yolo сказал:

Сам процесс выбора. Просто вытягивая из гриба в голове будет представление, что получу не хуже след грибницу (я не знаю на сколько это верно). Я как бы беру вытяжку из результата.

 

Вырезая из мицелия на агаре - насколько понятно или наглядно, что я выбираю наилучший для плодоноса стрейн. Является ли только ризоморфность и скорость роста показателями сильного плодоношения?

 

Ну это же творческий процесс. Ты как бы чуствуешь гриба и выращиваешь его по подходящим условиям от ризоктиний через ризоморфы до  примордий, склероций,  апотеций, и других плодовых тел. Просто пересадки и монокультура важны для быстрого роста и плодоношения. Нельзя вот так просто взять ведро субстрата и закинуть туда крапаль спор и ждать, что все быстро зарастет и потом заплодоносит. Агар очень важен на начальной стадии для того чтоб отсечь от культуры контоминантов. Хорошие быстрые ризморфы можно получить и другими методами и пересадками на субстрате. Но там уже намного сильнее потери, если изначально культура не чистая, а на агаре балуйся сколько хочешь.  Оптимального способа определения, что вот этот кусок гиф самый отличный и с него получится класный гров не существует.  При пересадке миц может повести себя как угодно и даже самые перспективные, на первый взгляд, потом могут загнутся. Но когда ты проведешь на каждом этапе отбор удаляя с 10 чашек больной и тупящий миц и выбирая тройку лучших, шансы на общий успех значительно возрастут.  

Изменено 8 июня 2020 пользователем tymko

[Hamsabala]

@Yolo 

23 часа назад, Yolo сказал:

Я как бы беру вытяжку из результата.

Верно.

 

23 часа назад, Yolo сказал:

Является ли только ризоморфность и скорость роста показателями сильного плодоношения?

Не является.

 

Клонирование и работа с агаром - разные по своим целям процессы.

 

Агар нужен для того, чтобы выделить культуру/мицелий, который будет быстро расти, что сокоратит время на обрастание банок/субстрата, чтобы рост и плодоношение были равномерными, что позволяет получить бОльший урожай.

 

Клонирование позволяет выделить подходящую генетику.

 

Клонирование и агар вместе создают синергию.

[Hamsabala]

3 дня после переноса.
20 чашек GT, Argentina и CRS

Все прекрасно. Новый агар явно пришелся по вкусу всем. Жду не дождусь полного заростания, чтобы инокулировать зерно.

[Hamsabala]

6-й день после переноса.
Новые стрейны радуют взор.

Верхний ряд - GT, нижний - Argentina.
GT немного быстрее растет и на первом переносе уже показывает ризоморфный мицелий.

Из всех стрейнов, что я растил на агаре, GT пока что фаворит.

CRS не спешит, пушит.
]
Хорошо, что мертвые сектора не появляются. очень надеюсь, что мне удалось изолировать культуру от контаминантов.

Хочу поделиться своим способом борьбы с конденсатом в чашках.
После разлива агара, остывания и пересадки я не стал запечатывать чашки и оставил их в сабе на 2 суток. Конденсат исчез в 14-ти из 20-ти чашек. После я запечатал чашки и оставил при комнатной температуре.  :sun:

[Hamsabala]

Сегодня все текущие чашки помещены в холодильник. Но сначала я сделал переносы с одной чашки GT и одной чашки Argentina

очень надеюсь, что Т2 покажет более сильный ризоморфный мицелий у обоих стрейнов.
CRS пока растет

Сегодня наконец опробовал альтернативу Parafilm-у

Садовая лента. Очень тонкая. прочная, в меру эластичная. Для запечатывания чашек петри подходит идеально. И главное цена - 150р за рулон.

Кому интерессно -

Войдите или зарегистрируйтесь для просмотра содержимого. Купить семена конопли.

[Yolo]

Было бы круто скомпоновать это потом в пошаговое пособие по выбору наиболее сильных монокультур.

[Hamsabala]

@Yolo 

Будет сделано, но позже.

 

[Hamsabala]

Тему переименовал, чтобы каждый чувствовал себя свободным написать в ней о своих успехах/трудностях/неадачах/опыте/достижениях

[Hamsabala]

Я вчера сделал очередной перенос культур.

Переносу подвергся самый красивый экземпляр CRS:


Самые красивые экземпляры Argentina (слева) и GT (справа):

После переноса этим агаром инокулировал банки. Готовлю два 3л контейнера под засев...

А еще вырос вот такой интересный экземпляр GT:

Как видно на фото, сначала все было в норрме, но потом мицелий видоизменился и стал больше похож на редкую траву, чем на мицелий. Гифы стали расти вверх. С этого феномена я тоже сделал перенос.

 

[Hamsabala]

В 26.06.2020 в 20:48, Hamsabala сказал:

А еще вырос вот такой интересный экземпляр GT:

Как видно на фото, сначала все было в норрме, но потом мицелий видоизменился и стал больше похож на редкую траву, чем на мицелий. Гифы стали расти вверх. С этого феномена я тоже сделал перенос.

С этого странного мицелия вырос самый обычный миц

[hellzag]

подскажите, через сколько появляется мицелий на агаре? инокулировал с принта/шприца...

[Hamsabala]

@hellzag

Активация спор может занять до пяти дней. Обычно на 3-й день при внимательном рассмотрении видно начало распространения мицелия

[hellzag]

если в одной из чашек петри мицелий стартанул раньше всех с хорошим развитием, то это ризоморф?

[Hamsabala]

@hellzag

Не обязательно. Ризоморфный мицелий отличается не только скоростью роста, но и видом.

 

[hellzag]

на агаре появилось множество точек мицелия и он пушит, теперь начинать пересаживать эти точки на другой агар?

 

Изменено 2 августа 2020 пользователем hellzag

[Hamsabala]

@hellzag 

Да, чем раньше делать первый перенос, тем больше вероятность получить изолированную культуру.

[Hamsabala]

Наглядный пример разных видов мицелия

Первый перенос после споровой инокуляции. Очевидно, какая часть (ризоморфная, верхняя) пойдет на дальнейшую пересадку или a2g инокуляцию.

Изменено 17 августа 2020 пользователем Hamsabala