• Нравится 2
Перейти к публикации

Общие вопросы по выращиванию культуры на агаре.

Оцените эту тему


Hamsabala

Рекомендованные сообщения

Я думаю, многим будет интересно понаблюдать, а потом самим заняться таким увлекательным процессом как посев спор и перенос мицелия на питательные среды в чашках Петри.

Моя цель - после мультиспоровой инокуляции методом переноса мицелия выделить равномерно и быстро растущий мицелий.

Рабочий материал:

Psilocybe Cubensis "Burma"

Psilocybe Cubensis Colombian Rust Spore

 

 

 

Начало.

День 1.

После последних приключений, описанных в Части 1. У меня оставалось несколько чашек Петри с мицелием Psilocybe Cubensis "Burma". Этот мицелий не подходил для иколуляции зерна, и я решил продолжить его пересадку на агаре. Я взял Т4 мицелий и сделал пятый перенос. Получил 13 чашек Петри.
В этот же день я инокулировал спорами еще 6 чашек: 3*Burma + 3*CRS

 

День 2. 

Burma активизоровалась и в споровых, и в мицелиевых чашках. CRS тоже активизировался, но через 12 часов.

 

День 3. 

Во всех чашках со спорами появились признаки бактерий. В половине Т5 чашек тоже. Это случилось из-за одного моего нововведения в процесс работы, которое я, по понятным причинам, больше использовать не буду. Решено было споры перенести в новые чашки, а за Т5 чашками еще последить. 
Итого, я располагаю следующими материалами:
Т5 мицелий - 13 чашек
Споры Burma - 6 чашек
Споры CRS - 6 чашек

 

День 4.

Мицелий, споры, бактерии... все живет.

 

День 5.

Споры почти во всех чашках оживились. CRS отстает от Burma, активизируется позднее, развивается намного медленнее, споры на в одной чашке даже не активизировались. На снимках ниже явно видна разница в скорости развития.

Два лучших экземпляра Burma:

MSB_1.thumb.jpg.300a2a5cfb758e61e81ba15254dd8141.jpgMSB_2.thumb.jpg.64a0d590fa55ee126d60952d8fe95b11.jpg

Лучший экземпляр CRS:

CRS_1.thumb.jpg.47cd48277c97d30abe89c9823bfbb06f.jpg

 

День 6.

Вот несколько фото неудачных переносов, за которыми теперь интересно наблюдать:

T5_3_1.thumb.jpg.59aa5a224069ba0348f7c692d073fe97.jpgT5_4_1.thumb.jpg.41a8c94f1c179bc699652852ed53e4b3.jpgT5_5_1.thumb.jpg.d4e2d7167642281dceca7d9efaae2d45.jpg

 

День 7-9.

Вот так выглядят чашки со спорами:

CRS_1_4.thumb.jpg.7cfec1544601636ac7457bd0297054d8.jpgCRS_2_4.thumb.jpg.d2b4c988bec1e54482fb2d4038bde5cd.jpgMSB_1_4.thumb.jpg.732bb02b6e5b531a0edac4b996f2292a.jpgMSB_2_4.thumb.jpg.8a311981154dc5f44a62f08740ae622a.jpg

Споры Burma растут быстрее, но более хаотично.

 

Вот так выглядят почти все не зараженные контаминантами чашки с Т5 мицелием

T5_6_3.thumb.jpg.4269ff1683a040835f33db2c19700f7b.jpg

Мицелий растет равномерно, это уже хороший результат изолирования культуры. Нет ризоморфных образований. На их отсутствие может влиять слишком питательный агар. В нем достаточно питательных веществ, и мицелию не надо быстро расти в поисках пищи.

 

Бактериальные противостояния продолжаются.

T5_3_3.thumb.jpg.c7ed4b98f06f7ed9388d1c0bceb829c1.jpg T5_4_3.thumb.jpg.bed019e474ea6dbbf1c541542dfe6f25.jpg T5_5_3.thumb.jpg.887d39663eb76ccdabfe43896ec56299.jpg

На последнем фото и не бактерии вовсе. Оказался незаметный кусок мицелия, который тоже вырос, слился со старшим братом и двинулся вместе с ним.

 

Завтра или послезавтра будет работа по переносу на новый агар.

 

И напоследок пару гифок

CRS_1_gif.gif.5bf13bd4e034eae366a4275811db9aaa.gifMSB_2_gif.gif.f5051e64d3aa3ec01f121f02e73177ff.gif

 

День 10.

Сегодня была операция по спасению от бактериального заражения Т5 мицелия. Шестой перенос этой культуры, полученной из спор 40 дней назад.
Photo_01.thumb.jpg.f3e795822cf498bf8b81087f3bcba42a.jpgPhoto_02.thumb.jpg.9fc4ca71ae12604fccee98f303424055.jpg
Из 8 зараженных чашек, я вырезал и пересадил 13 кусочков. Я выбирал  области мицелия, которые максимально удалены от участков с бактериями и удалены от края чашки. Это минимизирует возможность переноса бактерий.
Также я сделал трансфер мицелия из чашек со спорами. Я взял одну чашку Burma и одну чашку Rusty Spore, и вырезал из них по 3 кусочка.
Для этих переносов я сделал слабо питательный агар, чтобы посмотреть, покажет ли Т6 мицелий ризоморфный рост и как себя поведет на бедной среде сопровый мицелий после первой пересадки.

 

День 11.

Сегодня оставшиеся Т5 чашки и чашки с мицелием после споровой инокуляции отправлены в холодильник. В холодильнике я имею чашки с 3-м, 4-м и теперь 5-м переносом. Изменения в равномерности и скорости роста мицелия после каждого переноса очень заметны. Фото:

Photo_03.thumb.jpg.5a73dc66428fe4b7340751cfb6a2a7f7.jpgPhoto_04.thumb.jpg.c69dd2b50146a1e53f8e9f5163ad2f5e.jpgPhoto_05.thumb.jpg.0e313f31367e7585198f32b91cb8f6fc.jpg

 

Наблюдения и работа теперь будут вестись с Т6 мицелием и ТС1 (первый перенос после инокуляции спорами) мицелием. Через 24 часа после переноса Т6 и ТС1 мицелий показывают активность. На всех перенесенных кусочках агара виден рост мицелия, он уже перебирается на новый агар.

T6_1_1.thumb.jpg.3f7bf0b65b6e8e287eb179383149b481.jpgT6_2_1.thumb.jpg.3007dd8e104367914b353a6033351ef3.jpgTC1B_1_1.thumb.jpg.6bd036f3e13146780a717ee929ec2a23.jpgTC1R_1_1.thumb.jpg.a6721671fa6718790f352281b8be5fb3.jpg

 

День 12.
Все растет. Вот два фаворита 2-го дня роста:
T6_3_2.thumb.jpg.6bf46261ea82922b43f01e6279e96923.jpgT6_2_2.thumb.jpg.94e6c04da025d9ea3cdb090ba9ebc37d.jpg
Т6 мицелий уже формирует ризоморфы.

 

День 13.

Все растут. Фаворит сегодняшнего дня.

T6_2_3.thumb.jpg.d76d20eec27c0ea34b2ee1834c3d4c78.jpg

 

День 14-17

Сегодня я убрал все, кроме одной, чашки в холодильник.

По порядку.

Т6 мицелий Burma. Это 6-й пренос мицелия, и за все время я так и не добился 100% ризоморфоного мицелия ни в одной чашке. Вот 4 чашки Т6 мицелия. 

Photo_08.thumb.jpg.9271871c2ac648fb699b96ecc3c05d78.jpg

Работа с этим мицелием не останавливается. В будущем я планирую:

- инокулировать им зерно

- пересадить на более питательный агар, когда получу солодовый экстракт.

 

Про первый перенос Burma после споровой инокуляции тоже говорить нечего. мицелий прозрачный, пушистый, 

Photo_10.thumb.jpg.5a5223d145f3db08c99d44b5990a2168.jpg

 

Первый перенос Colombian Rust Spore радует. Несмотря на то чно это далеко не изолированная культура, растет он равномерно. 

Photo_09.thumb.jpg.e65945e4afe173ffbf08d8d6b3bdd38f.jpg

 

Одну из этих чашек я оставил, что бы мицелий продолжал расти. Все остальное, теперь в холодильнике ждет свего часа.

 

Изменено пользователем Hamsabala
Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

  • Ответы 95
  • Создано
  • Последний ответ

Лучшие авторы в этой теме

  • Hamsabala

    50

  • Yolo

    9

  • tymko

    5

  • Pik

    5

Лучшие авторы в этой теме

  • Hamsabala

    Hamsabala 50 публикаций

  • Yolo

    Yolo 9 публикаций

  • tymko

    tymko 5 публикаций

  • Pik

    Pik 5 публикаций

Опубликованные изображения

Желаю  успеха в твоих изысканиях и получении опыта . Почти одновременно с тобой стартанули с похожими целями)) 

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

Привет!

Интересно читать, и фотки хорошие!

Не мог бы ты рассказать чуть больше о материалах и технике работы?

Похоже ты используешь чашки из какого-то пластика. Они одноразовые, или их можно стерилизовать в скороварке?

Чем ты их заклеиваешь? Специальной пленкой, типа Parafilm, что используют заокеанские гроверы, или чем-то еще?

Может подскажешь где купить чашки и ленту?

Как ты переносишь агар между чашками и банками? Гловбокс? Ламинар? Можешь показать конструкцию?

 

Спасибо, и удачи в опытах!

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

@shturman , благодарю.

 

6 часов назад, shturman сказал:

Похоже ты используешь чашки из какого-то пластика

Это пластиковые, стерильные одноразовые чашки Петри. Мне больше понравилось работать с ними, чем со стеклянными.

 

6 часов назад, shturman сказал:

Чем ты их заклеиваешь?

Заклеиваю Parafilm-ом. Сейчас нет возможности за ним съездить, так что в дело идет обычный скотч, который, к слову, очень неприятно пахнет при нагреве в парнике.

 

6 часов назад, shturman сказал:

Может подскажешь где купить чашки и ленту?

Чашки - пробахилы.рф

Parafilm -  в поисковике напиши "parafilm купить (свой или ближайший город)"

 

6 часов назад, shturman сказал:

Как ты переносишь агар между чашками и банками? Гловбокс? Ламинар? Можешь показать конструкцию? 

Процессы эти описаны до мелочей уже много раз. Возможно и я, когда возникнет необходимость, сделаю подобное.

Я использую SAB - still air box. Позднее напишу подробнее.

Изменено пользователем Hamsabala
Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

UPD

Добавлен День 6. С бактериальными видами.

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

8 минут назад, Hamsabala сказал:

UPD

Добавлен День 6. С бактериальными видами.

:icon_thumbs:  Супер) И да, каждый сам определяет свой путь)

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

@Hamsabala , спасибо за ответ!

Скажи пожалуйста, ты эти чашки используешь повторно, или выкидываешь?

И насчет Parafilm, на али есть дорогой брэндовый парафильм, а есть какой-то дешевый "садовый".

Садовым дешевым на фотографиях приматывают какие-то ветки фруктовых деревьев, прививают что-ли.

Каким ты пользуешься?

Еще интересен рецепт агара, ( тот что используешь ты ) 

 

И не совсем понятно что делают в финале с супер классным результатом на агаре. 

(Когда ты решаешь вырастить с него урожай, и тебе нужно много обросшего зерна)

Кусочек/кусочки помещают в банку, потом G2G трансфер? (кажется не удобным)

Делают жидкую культуру?

 

6 часов назад, Hamsabala сказал:

Процессы эти описаны до мелочей уже много раз.

Извини что отвлекаю!

Да, есть куча хороших видео где все показано (грибы начали мне их демонстрировать на youtube задолго до того,

как я решился, точнее понял что все более чем реально осуществить :icon_wink:

По этому сильно разжевывать не нужно.

Мне итересен именно твой опыт реализации на практике, в наших условиях.

Имею ввиду доступность товаров и адаптацию к нашим реалиям.

В общем, если будет настроение, напиши. 

 

Спасибо! 

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

5 часов назад, shturman сказал:

Скажи пожалуйста, ты эти чашки используешь повторно, или выкидываешь?

Выкидываю

 

5 часов назад, shturman сказал:

И насчет Parafilm, на али есть дорогой брэндовый парафильм, а есть какой-то дешевый "садовый".

Я пользуюсь Parafilm. Тот садовый тоже испольуют с чашками Петри. Его я заказал себе для пробы.

 

5 часов назад, shturman сказал:

И не совсем понятно что делают в финале с супер классным результатом на агаре. 

В финале берется чашка Перти с мицелием для пересадки. Мицелий можно  разрезать на кусочки 1*1см, можно крупнее. Чем больше будет кусочков в банке, тем быстрее заростет зерно. Обычно  мицелием из одной чашки я инокулюрую до 4-х литровых банок. Просто переношу агар в подготовленную банку с зерном. Делаю так, чтобы в одной банке было не меньше 4-х кусочков агара с мицелием. После того, как переносы сделаны, очень активно перетряхиваю банки.

 

5 часов назад, shturman сказал:

Еще интересен рецепт агара, ( тот что используешь ты ) 

Сейчас я  использую 2 рецепта агара.

 

С кукурузной мукой

1 литр воды

20 грамм агара

10 грамм кукурузной муки

5 грамм фруктозы

 

С ржаным солодом

1 литр воды

20 грамм агара

20 грамм ржаного солода

Это рабочий рецепт, основа. Иногда я что-то в него добавляю, ищу оптимальный для себя рецепт.

 

После 2-3-х переносов я меняю агар, чтобы культура не "расслаблялась".

Когда я делаю перенос в чашки, которые уйдут на хранение в холодильник, я использую менее питательный агар с кукурузной мукой.

Когда я делаю перенос в чашки, которые пойдут на инокуляцию банок с зеном, я использую рецепт с ржаным солодом. Так как я использую только рожь (иногда смесь ржи и пшеницы), то тем самым я сокращаю период задержки после инокуляции, который наблюдается, когда мицелий сталкивается с новой средой/компонентами.

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

В 19.04.2020 в 20:35, Hamsabala сказал:

Я использую SAB - still air box. Позднее напишу подробнее.

SAB - still air box - бокс с неподвижным воздухом.

Это может быть любой прозрачный контейнер подходящего размера. В нем надо сделать отверстия для рук. Внутри SAB-а происходит минимум движений и следовательно минимум движения воздуха, а это минимизирует вероятность заражения контаминантами. Его можно использовать с крышкой, а можно ставить на влажное полотенце, натертое антибактериальным мылом. Но SAB не отменяет подготовительную работу по очистке пространства и себя перед работой. Но со временем, становится понятно, что на очистку помещения можно тратить меньше внимания.

Как видно на фото, у меня старый, местами заклееный контейнер размером 40*30*25см, 30 литров. Это, наверное, минимально допустимый размер\объем. В нем достаточно места для работы с 5-10 чашками Петри или 4-мя литровыми банками. Но вот для работы  с 6-ю банками или с двумя десятками чашек лучше иметь контейнер бОльшего объема.

P4213712.thumb.jpg.f4351dd403979ef73fc4d3ef9b7b646a.jpgP4213713.thumb.jpg.fe7253e463d6e05b453eeab6644c7a28.jpg

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

@Hamsabala , спасибо что делишься, Бро!

Ты не стал пристегивать перчатки к боксу? Считаешь это лишнее?

Пользуешься спиртовкой для стерилизации скальпеля? Зажигаешь ее внутри ящика, или снаружи?

Прикидывал как делать отверстия для рук в своем ящике, и решил что наверно буду делать одно на узкой стороне, 

а второе на широкой, и подальше от первого. Кажется так будет удобнее. 

Хотя наверно это зависит еще и от того, где стоит ящик, и удобно ли будет работать/стоять с угла.

 

Про садовый парафильм - подумал что он наверное нестерильный в отличие от брендового.

 

Как думаешь, если в твоем базовом рецепте агара заменить всю воду и солод на литр отвара овса (подходящей для жидкой культуры концентрации),

получится годный агар для натаскивания мицелия на овес?

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

3 часа назад, shturman сказал:

Ты не стал пристегивать перчатки к боксу?

Я пробовал, вся прелесть неподвижного воздуха пропадает, рукава толкают туда-сюда воздух. С рукавами требуется герметичность.

 

3 часа назад, shturman сказал:

Зажигаешь ее внутри ящика, или снаружи? 

Снаружи и подальше от отверстий. В SAB-е может накопиться много паров спирта.

 

3 часа назад, shturman сказал:

Про садовый парафильм - подумал что он наверное нестерильный в отличие от брендового. 

Parafilm не стерильный.

 

3 часа назад, shturman сказал:

Как думаешь, если в твоем базовом рецепте агара заменить всю воду и солод на литр отвара овса

Будет годный, с картофелем так делают, но добавляют ещё декстрозу/фруктозу 10гр на литр.

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

UPD

Добавлен День 10. Спасение от бактерий.

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

UPD

Добавлен день 12 и 13.

 

Сегодня я наконец раздобыл газовую горелку. Пришел конец спиртовкам, свечкам и зажигалкам. Скальпель накаливается за пару секунд! :yahoo:

Photo_06.thumb.jpg.65f8e10673a57c5d3c1e803ef7a18b73.jpg

И всего за 2000р, а не за 5-6 т.р., что просят за такую в Европе и США

Войдите или зарегистрируйтесь для просмотра содержимого. Купить семена конопли.

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

Вчера сделал второй перенос Colombian Rust Spore
Рецепт агара пока не менял.

Photo_12.thumb.jpg.22663f631c16cc3c3be760fafb78fb19.jpgPhoto_11.thumb.jpg.17bb3bdf1efeae9add23945aa567b8a5.jpg

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

В 06.05.2020 в 07:05, Hamsabala сказал:

Вчера сделал второй перенос Colombian Rust Spore
Рецепт агара пока не менял.

Photo_12.thumb.jpg.22663f631c16cc3c3be760fafb78fb19.jpgPhoto_11.thumb.jpg.17bb3bdf1efeae9add23945aa567b8a5.jpg

Хороший опыт, помню начал с петри возиться - а они расплавились, дешёвый платик оказался! Закуплю на этот раз стеклянные, многоразовые и начну на агаре чудить, интересно было бы увидеть селекцию стрейна "RustyWhyte" - по идее там изначально с принта генетика мощнее!

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

6 часов назад, UltraFreak сказал:

по идее там изначально с принта генетика мощнее!

Почему у тебя сложилось такое мнение?

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

17 минут назад, Hamsabala сказал:

Почему у тебя сложилось такое мнение?

Сэр WarFlop меня просветил! Этот стрейн вывел Канадский шрумер PastyWhyte, там изначально шёл отбор всех лучших качеств от скрещиваемых стрейнов, далее его изолировали, т.е. принты с очень хорошего изолята на порядок лучше принтов с мультиспоры, на шрумери.орг можешь глянуть его заметки! От того и РастиВайт так понравился Crazy_Monaco, в его репорте вырос лес грибов, да и в других волны обильные, сам его с мультиспоры растил - грибки как на подбор, что редко со взвеси бывает...

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

Спустя неделю второй перенос со спор Colombian Rust Spore выглядит вот так.

Photo_14.thumb.jpg.c4ef816df40bede9b410fd0c71233d2f.jpg

 

Три последних дня не следил за ними, и сегодня обнаружил интересное явление - мицелий разделяется по краю, будто кто-то вырезает от него кусочки.

Изменено пользователем Hamsabala
Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

Photo_15.thumb.jpg.4970c2559e153782d686e3414d221a68.jpg

 

Самая вероятная версия - клетки мицелия умирают из-за заражения пенициллином. Я достал из холодильника материнскую чашку, на мицелии кажется есть сине-зеленая плесень. Чашку перенес в тепло, понаблюдаю...

Ссылка на комментарий
Поделиться на других сайтах

Присоединяйтесь к обсуждению

Вы можете опубликовать сообщение сейчас, а зарегистрироваться позже. Если у вас есть аккаунт, войдите в него для написания от своего имени.
Примечание: вашему сообщению потребуется утверждение модератора, прежде чем оно станет доступным.

Гость
Ответить в теме...

×   Вставлено в виде отформатированного текста.   Восстановить форматирование

  Разрешено не более 75 эмодзи.

×   Ваша ссылка была автоматически встроена.   Отобразить как ссылку

×   Ваш предыдущий контент был восстановлен.   Очистить редактор

×   Вы не можете вставить изображения напрямую. Загрузите или вставьте изображения по ссылке.

  • Сейчас на странице   0 пользователей

    • Нет пользователей, просматривающих эту страницу.

×
×
  • Создать...