Общие вопросы по выращиванию культуры на агаре.

[Hamsabala]

36 минут назад, Yolo сказал:

Я правильно понимаю, что многократная биопсия даст практически изолят?

Многократная биопсия чего?

[Yolo]

10 минут назад, Hamsabala сказал:

Многократная биопсия чего?

Биопсия гриба.

как я понял, при биопсии я захватываю порядка 500+- стрейнов из всего многообразия, который засажен в кейк. Из жм в дальнейшем зачерпываю тоже часть. Выращиваю. Делаю опять биопсию. По идее я зачерпну уже порядка 100 стрейнов?

 

я все в свою дудуку пиликаю. Агар мне видится дополнительным технологическим этапом. Я понимаю, что в агаре я могу выбрать лучший образец до посадки. Но итеративно  с жм разве я не приду практически к монокультуре?

Изменено 7 июня 2020 пользователем Yolo

[Hamsabala]

1 час назад, Yolo сказал:

Биопсия гриба.

как я понял, при биопсии я захватываю порядка 500+- стрейнов из всего многообразия, который засажен в кейк. Из жм в дальнейшем зачерпываю тоже часть. Выращиваю. Делаю опять биопсию. По идее я зачерпну уже порядка 100 стрейнов? 

У меня недостаточно знаний, чтобы дать четкий ответ. Давай рассуждать.

 

Ты выбираешь гриб, клонируешь его, сохраняешь в виде жидкого мицелия, берешь часть жидкого мицелия для инокуляции, выращиваешь похожие на выбранный гриб грибы, снова клонируешь выбранный гриб, повторяешь процесс.  Этот процесс позволит получть изолят, но это займет много больше времени, чем изолирование культуры на агаре. Потому что:

¤ приходиться растить грибы

¤ ты не имеешь возможность выделить нужный мицелий из жидкого мицелия.

 

На агаре это занимает меньше времени, потому что:

¤ не надо тратить время на выращивание.

¤ на агаре ты можешь выбирать сектора мицелия, которые хочешь продолжать растить.

[Yolo]

А есть какое-то мнение по вопросу - что наиболее наглядно? Взять самый (ризоморфный?) самый кусок мицелия с агара и его взращивать или брать биопсию самого плодовитого кейка (большой гриб - несколько тел из одной точки).

 

Просто я нацелен на периодическое взращивание поэтому пытаюсь понять, какой путь будет практичнее и проще. 

[Hamsabala]

8 минут назад, Yolo сказал:

А есть какое-то мнение по вопросу - что наиболее наглядно?

Что значит наглядно?

[Yolo]

Сам процесс выбора. Просто вытягивая из гриба в голове будет представление, что получу не хуже след грибницу (я не знаю на сколько это верно). Я как бы беру вытяжку из результата.

 

Вырезая из мицелия на агаре - насколько понятно или наглядно, что я выбираю наилучший для плодоноса стрейн. Является ли только ризоморфность и скорость роста показателями сильного плодоношения?

[tymko]

5 часов назад, Hamsabala сказал:

О! Наконец появились единомышленники.
Напишите, как вы боритесь с конденсатом в чашках.

 

Стандартно переворачиваю через какое-то время после переноса. Но конечно есть куча нюансов. Споры либо клон с гриба можно быстро переворачивать, кусок агара позже, чтоб не отвалился. Так же проблемы с переворачиванием у грибов с пушыстым мицем растущим в разные стороны для прикрепления - гериций, сморчки. Сейчас летом вообще хуже все будет и с конденсатом и с застыванием агара. Буду побольше его кидать.

[Hamsabala]

8 минут назад, tymko сказал:

Стандартно переворачиваю через какое-то время после переноса

Я так же делаю, но конденсат остается. А вот как его убрать?

[tymko]

10 часов назад, Hamsabala сказал:

Я так же делаю, но конденсат остается. А вот как его убрать?

А не знаю, он вроде не мешает, разве что смотреть иногда и фотографировать. А так заражения через него у меня не происходит.

 

Вот у меня типичный вид - конденсат на стенках и крышке. 

 

 

10 часов назад, Yolo сказал:

Сам процесс выбора. Просто вытягивая из гриба в голове будет представление, что получу не хуже след грибницу (я не знаю на сколько это верно). Я как бы беру вытяжку из результата.

 

Вырезая из мицелия на агаре - насколько понятно или наглядно, что я выбираю наилучший для плодоноса стрейн. Является ли только ризоморфность и скорость роста показателями сильного плодоношения?

 

Ну это же творческий процесс. Ты как бы чуствуешь гриба и выращиваешь его по подходящим условиям от ризоктиний через ризоморфы до  примордий, склероций,  апотеций, и других плодовых тел. Просто пересадки и монокультура важны для быстрого роста и плодоношения. Нельзя вот так просто взять ведро субстрата и закинуть туда крапаль спор и ждать, что все быстро зарастет и потом заплодоносит. Агар очень важен на начальной стадии для того чтоб отсечь от культуры контоминантов. Хорошие быстрые ризморфы можно получить и другими методами и пересадками на субстрате. Но там уже намного сильнее потери, если изначально культура не чистая, а на агаре балуйся сколько хочешь.  Оптимального способа определения, что вот этот кусок гиф самый отличный и с него получится класный гров не существует.  При пересадке миц может повести себя как угодно и даже самые перспективные, на первый взгляд, потом могут загнутся. Но когда ты проведешь на каждом этапе отбор удаляя с 10 чашек больной и тупящий миц и выбирая тройку лучших, шансы на общий успех значительно возрастут.  

Изменено 8 июня 2020 пользователем tymko

[Hamsabala]

@Yolo 

23 часа назад, Yolo сказал:

Я как бы беру вытяжку из результата.

Верно.

 

23 часа назад, Yolo сказал:

Является ли только ризоморфность и скорость роста показателями сильного плодоношения?

Не является.

 

Клонирование и работа с агаром - разные по своим целям процессы.

 

Агар нужен для того, чтобы выделить культуру/мицелий, который будет быстро расти, что сокоратит время на обрастание банок/субстрата, чтобы рост и плодоношение были равномерными, что позволяет получить бОльший урожай.

 

Клонирование позволяет выделить подходящую генетику.

 

Клонирование и агар вместе создают синергию.

[Hamsabala]

3 дня после переноса.
20 чашек GT, Argentina и CRS

Все прекрасно. Новый агар явно пришелся по вкусу всем. Жду не дождусь полного заростания, чтобы инокулировать зерно.

[Hamsabala]

6-й день после переноса.
Новые стрейны радуют взор.

Верхний ряд - GT, нижний - Argentina.
GT немного быстрее растет и на первом переносе уже показывает ризоморфный мицелий.

Из всех стрейнов, что я растил на агаре, GT пока что фаворит.

CRS не спешит, пушит.
]
Хорошо, что мертвые сектора не появляются. очень надеюсь, что мне удалось изолировать культуру от контаминантов.

Хочу поделиться своим способом борьбы с конденсатом в чашках.
После разлива агара, остывания и пересадки я не стал запечатывать чашки и оставил их в сабе на 2 суток. Конденсат исчез в 14-ти из 20-ти чашек. После я запечатал чашки и оставил при комнатной температуре.  :sun:

[Hamsabala]

Сегодня все текущие чашки помещены в холодильник. Но сначала я сделал переносы с одной чашки GT и одной чашки Argentina

очень надеюсь, что Т2 покажет более сильный ризоморфный мицелий у обоих стрейнов.
CRS пока растет

Сегодня наконец опробовал альтернативу Parafilm-у

Садовая лента. Очень тонкая. прочная, в меру эластичная. Для запечатывания чашек петри подходит идеально. И главное цена - 150р за рулон.

Кому интерессно -

Войдите или зарегистрируйтесь для просмотра содержимого. Купить семена конопли.

[Yolo]

Было бы круто скомпоновать это потом в пошаговое пособие по выбору наиболее сильных монокультур.

[Hamsabala]

@Yolo 

Будет сделано, но позже.

 

[Hamsabala]

Тему переименовал, чтобы каждый чувствовал себя свободным написать в ней о своих успехах/трудностях/неадачах/опыте/достижениях

[Hamsabala]

Я вчера сделал очередной перенос культур.

Переносу подвергся самый красивый экземпляр CRS:


Самые красивые экземпляры Argentina (слева) и GT (справа):

После переноса этим агаром инокулировал банки. Готовлю два 3л контейнера под засев...

А еще вырос вот такой интересный экземпляр GT:

Как видно на фото, сначала все было в норрме, но потом мицелий видоизменился и стал больше похож на редкую траву, чем на мицелий. Гифы стали расти вверх. С этого феномена я тоже сделал перенос.

 

[Hamsabala]

В 26.06.2020 в 20:48, Hamsabala сказал:

А еще вырос вот такой интересный экземпляр GT:

Как видно на фото, сначала все было в норрме, но потом мицелий видоизменился и стал больше похож на редкую траву, чем на мицелий. Гифы стали расти вверх. С этого феномена я тоже сделал перенос.

С этого странного мицелия вырос самый обычный миц

[hellzag]

подскажите, через сколько появляется мицелий на агаре? инокулировал с принта/шприца...

[Hamsabala]

@hellzag

Активация спор может занять до пяти дней. Обычно на 3-й день при внимательном рассмотрении видно начало распространения мицелия

[hellzag]

если в одной из чашек петри мицелий стартанул раньше всех с хорошим развитием, то это ризоморф?

[Hamsabala]

@hellzag

Не обязательно. Ризоморфный мицелий отличается не только скоростью роста, но и видом.

 

[hellzag]

на агаре появилось множество точек мицелия и он пушит, теперь начинать пересаживать эти точки на другой агар?

 

Изменено 2 августа 2020 пользователем hellzag

[Hamsabala]

@hellzag 

Да, чем раньше делать первый перенос, тем больше вероятность получить изолированную культуру.

[Hamsabala]

Наглядный пример разных видов мицелия

Первый перенос после споровой инокуляции. Очевидно, какая часть (ризоморфная, верхняя) пойдет на дальнейшую пересадку или a2g инокуляцию.

Изменено 17 августа 2020 пользователем Hamsabala

[filos]

В 02.06.2020 в 13:02, Hamsabala сказал:

Чтобы закрепить или выделить определенные характеристики стрейа, быстрый рост например или крупные плодовые тела, или мутанты, то надо клонировать. И клонировать опять таки на агар

 

Приветствую, бро! А в медовый раствор клонировать - не то? У меня сейчас растет медузка из биопсии самого крупного CRS с первого грова. Замочил уже и рожь под нее.

[Hamsabala]

В 28.08.2020 в 19:59, filos сказал:

Приветствую, бро! А в медовый раствор клонировать - не то? У меня сейчас растет медузка из биопсии самого крупного CRS с первого грова. Замочил уже и рожь под нее.

Привет. Мне сложно представить, как из медового раствора размножить мицелий клона для инокуляции нескольких банок. Наверное есть способ, но агар и чашки Петри для меня - самый простой путь для работы с культурой

[filos]

6 часов назад, Hamsabala сказал:

Привет. Мне сложно представить, как из медового раствора размножить мицелий клона для инокуляции нескольких банок. Наверное есть способ, но агар и чашки Петри для меня - самый простой путь для работы с культурой

А что тут сложного? Я вчера инокулировал 3 банки и пакет, и на это ушла малая часть ЖМ. Оставшееся можно хоть до бесконечности размножать, инокулируя новые баночки с медовым раствором. Или я что-то неправильно понимаю?

[Hamsabala]

@filos 

В чем ты хранишь ЖМ? Как его забираешь для инокуляции?

[filos]

@Hamsabala храню в бутылочке с инокуляционным портом, забираю шприцом.

[Hamsabala]

@filos 

Понял. Да, тут явно дело личных предпочтений.

[Nick Nick]

Или в общем заражении помещения.

А с ЖМ без всякого кварцевания. С обычной рюмкой спирта. Проводится чистая инокуляция.

[Trufel]

Доброго времени!) Плиз хелп) Вчера  посадил в чашки петри и баночки, на питательный раствор (агар+мед и отвар картофель+пшеница) кусочки материала из шляпки и ножки гриба, надеюсь что-то из этого получится)? Подскажи пожалуйста новичку, какие должны быть условия для обрастания этой прелести?  И в случае успеха, как долго и где лучше хранить?

Спасибо!)

[Hamsabala]

@Trufel 

Привет.

Если не спешишь - то просто оставь при комнатной температуре. Если не терпится, то можно поместить в парник с температурой 28 градусов, будет расти быстрее.

Когда мицелий доберется до краев чашек/банок - убирай их в холодильник, там рост остановится. Храниться может долго. Год точно. Лучше в холодильнике хранить в перевёрнутом положении, чтобы вероятный конденсат не залил культуру.

Удачи!

[Trufel]

16 часов назад, Hamsabala сказал:

@Trufel 

Привет.

Если не спешишь - то просто оставь при комнатной температуре. Если не терпится, то можно поместить в парник с температурой 28 градусов, будет расти быстрее.

Когда мицелий доберется до краев чашек/банок - убирай их в холодильник, там рост остановится. Храниться может долго. Год точно. Лучше в холодильнике хранить в перевёрнутом положении, чтобы вероятный конденсат не залил культуру.

Удачи!

Провал по ходу, буду пробовать снова... Спасибо!?

[Hamsabala]

@Trufel 

Однозначно провал. Дерзай!

[semilancetic]

Всем привет! Что-то тема подзавяла..

Подскажите, это нормальный вид мицелия?

[Pik]

36 минут назад, semilancetic сказал:

Подскажите, это нормальный вид мицелия?

Panaeolus?

[semilancetic]

57 минут назад, Pik сказал:

Panaeolus?

Удивишься.

P. Semilanceata

[Pik]

1 час назад, semilancetic сказал:

Удивишься.

P. Semilanceata

Нормально выглядит.

[я не кот]

Здравствуйте!... Приготовил 20 чаш спастеризованным pda агаром... На 3 чашах сделал трансфер. 17 чаш в перевёрнутом виде поместил в холодильник. Скажите сколько они могут храниться незасеяными никакой культурой? 

[Navi_tor]

Всем спасибо за информацию и что делитесь своими навыками и экспериментами. 
Но вот уже какая тема подряд не раскрывает идеального или максимально стерильного переноса из чашек на зерносубстрат. Поделитесь плиз.

[Pik]

23 минуты назад, Navi_tor сказал:

Но вот уже какая тема подряд не раскрывает идеального или максимально стерильного переноса из чашек на зерносубстрат. Поделитесь плиз.

Это делается в САБе. Вырезаешь скальпелем кусочек чистого мицелия и закидываешь его в банку со стерильным зерном.

САБ делается просто - выжигаются раскалённой банкой от кофе отверстия для рук на широкой стороне. Сторона где крышка в низ на полотенце. На полотенце решётка. Всё просто.

[Pik]

02.07.2023 в 09:51, я не кот сказал:

Здравствуйте!... Приготовил 20 чаш спастеризованным pda агаром... На 3 чашах сделал трансфер. 17 чаш в перевёрнутом виде поместил в холодильник. Скажите сколько они могут храниться незасеяными никакой культурой? 

От чистоты зависит, теоретически месяц или два думаю спокойно будут. Пока какая нибудь зараза не попадёт. Лучше сразу использовать.

[Navi_tor]

46 минут назад, Pik сказал:

Это делается в САБе. Вырезаешь скальпелем кусочек чистого мицелия и закидываешь его в банку со стерильным зерном.

САБ делается просто - выжигаются раскалённой банкой от кофе отверстия для рук на широкой стороне. Сторона где крышка в низ на полотенце. На полотенце решётка. Всё просто.

 

САБ есть. Но в любом случае при открытии банок со стерилизованным зерном герметичность и стерильность нарушаются при переносе. Именно по этому интересовался, что может есть какой либо лайфхак на этом этапе.

[Pik]

3 минуты назад, Navi_tor сказал:

 

САБ есть. Но в любом случае при открытии банок со стерилизованным зерном герметичность и стерильность нарушаются при переносе. Именно по этому интересовался, что может есть какой либо лайфхак на этом этапе.

В сабе не должно быть никаких заражений, Там стабильный воздух, который ты до этого обеззаразил мыльной водой или спиртом 70%.

[Дубас Грибоедович]

привет. 
Очень интересная тема.  спасибо
Может не совсем по теме спрашиваю, меня интересует , как переносят агар на корневую систему растений что бы получить микоризу гриба с корнями ? Например белого гриба.
не могу найти в сети никакой информации