Возвращение в хобби Psilocybe Cubensis "Burma"

[Hamsabala]

Предыстория.

Когда-то, давным-давно, я занимался выращиванием того, что нельзя, но очень хочется. Бездумно читал репорты, повторял и следовал инструкциям, не углубляясь в сути процессов и возникающих у меня вопросов. И вот снова потянуло... Желание это появилось не спонтанно, но это совсем другая история. Прежде, чем начать все по новой, я постарался подготовиться настолько хорошо, насколько позволяли мой пыткий ум, возникший интерес, интернет и собственные возможности. Подготовка заняла несколько месяцев. За это время я:

- сначала прочитал по несколько раз около десятка книг по микологии.

- вместе с этим прочитал несколько десятков научных статей\докладов\исследований по этой же теме.

- во время изучения материала стал тренироваться на легальных культивируемых грибах.

- только после этого вернулся на тематические форумы.

- выбрал подходящий мне способ выращивания.

- подготовил список необходимого оборудования.

- с минимальной погрешностью посчитал бюджет.

- передохнул.

И с ясной головой взялся за реализацию проекта ПСИ. В спокойном режиме, следуя четкому плану, я начал закупки и подготовку пространства для размещения парника. На 4-й день был успешно произведен генеральный прогон для проверки всего оборудования и микроклимата.

Также в эти дни была проведена пробная инокуляция спорами двух чашек Петри и одной банки с зерном. Делал я это для того, чтобы проверить эффективность моих манипуляций по очистке помещения и инструмента, стерилизации посуды и зерна. Пробные прогоны показали, что можно переходить к основным действиям, потому что все работало как часы, контаминантов по прошествии контрольного срока ни в чашках Петри, ни в банке с зерном обнаружено не было.

 

Теперь история.

 

"Всегда проверяйте неиспытанные штаммы перед инокуляцией больших объемов субстрата."

Paul Stamets & J.S. Chilton The mushroom cultivator.

 

Глава I.  Обычная история с необычным концом.

 

День 1.

Я выбрал рожь.  Взял две банки по 800мл, насыпал в каждую по 200мл зерна и по 150мл воды.

Дальше 90 минут кипячения в кастрюле. В этот же день в 10мл шприце были подготовлены споры для предстоящей инокуляции.

 

День 2.

Снова 90 минут кипячения в кастрюле. Естественное остывание. Инокуляция по 5мл споровой взвеси в каждую банку. 

Остывшие, инокулированные, хорошо перетряхнутые банки перед установкой в инкубатор с температурой 28-29 °С:

 

День 3. 

Тишина.

 

День 4. 

Замечены первые появления мицелия.

 

День 5.

Мицелий был на каждом зерне. Меня очень порадовал темп развития мицелия, и я с радостью перетряхнул банки.

 

День 6-7.

Активный рост мицелия на зерне.

 

День 8.

Мицелий снова был на каждом зерне, но уже более плотный, чем перед перетряхиванием. Одна банка обросла немного лучше другой. Но в обоих банках развитие мицелия остановилось. 

И вот тут из-за кулис на сцену выходит моя самая первая пробная банка. В нее было впрыснуто очень мало спор, но в День 5 я её тоже перетряхнул, ради эксперимента, хотя зерно там обросло крайне скудно. Так вот эта банка с тех пор, как я её перетряхнул, не подавала признаков жизни вовсе. Но я не беспокоился по этому поводу, потому что и не рассчитывал на эту банку. Она для меня была показателем чистоты моих операций. В ней было пусто, нет мицелия, но и нет "посторонних" и это меня успокаивало.

 

День 9.

Я начал беспокоиться. Мицелий явно затормозил развитие. При внимательном рассмотрении было видно, что мицелий стал плотный и новых гиф не выпускал. 

Весь день размышляя и изучая вопрос, я решил регидрировать зерно. 150 мл воды на 200 грамм зерна при стерилизации, не замачивая, оказалось маловато, зерно действительно выглядело сухим, поверхность зерен посветлела, пропал блеск. Я добавил в две рабочие банки по 10мл воды для инъекций.

 

День 10.

В регидрированных банках изменений замечено не было. Первая пробная банка радовала своей тишиной. 

Понимая, что процесс обрастания моих первых банок может затянуться надолго, а желание перейти к следующему этапу не давало покоя, я начал подготовку еще двух банок с зерном, снова рожь.

И тут на сцену выходят уже забытые чашки Петри с высаженными спорами.  За прошедшие дни я сделал один перенос мицелия в новые чашки Петри, и на этот день у меня было 3 чашки. Мицелий в них был неоднородный, очень пушистый. В каждой чашке я выбрал маленькие участки, где были замечены хоть какие-то зачатки ризоморфного мицелия, и они были пересажены в 9 новых чашек. Второй трансфер мицелия (будем называть его Т2 мицелий) с агара на агар прошел успешно.

 

День 11.

Я взял банку с наиболее развитым мицелием и инокулировал им 2 свежеприготовленные банки с зерном.

По итогу у меня теперь стало 4 банки.

1 - экспериментальная, которая до сих пор (а именно 7 дней) не подавала никаких признаков жизни.

2 - одна их первых двух, которая после остановки мицелия (4 дня) не обросла ни на йоту.

3, 4 - новые, инокулированные зерном банки.

 

 

День 12.

Во всех банках тишина

Т2 мицелий в чашках Петри показывал хороший рост, и в 3-х чашках из 9-ти появились маленькие области ризоморфного мицелия. 

 

День 13.

В 3-х чашках Петри ризоморфный Т2 мицелий  выстрелил так, что на следующий день я запланировал его пересадку.

В банках была тишина.

В этот день я чуть не решил снова регидрировать и уже все банки. Но было время все обдумать, и я отпустил эту идею. Ведь с момента инокуляции g2g прошло всего три дня, а то, что в старых банках ничего не растет, так с этим надо смириться и оставить банки в покое. 

Я занялся пересадкой мицелия с агара на агар. Из 3 чашек Петри я перенес ризоморфные части мицелия в 12 новых чашек.

И занимаясь этим увлекательным процессом, я обратил внимание на то, что во всех 9-ти чашках Петри рост мицелия остановился, хотя он был заметен с первого дня после его пересадки. Еще одни факт - мицелий на агаре был хилым, еле видимым пушком, а местами его выдавало только то, что поверхность агара, где мицелий точно был, стала матовой. Только в трех чашках были небольшие сектора сильного, хорошо видимого и развитого мицелия. Вот изображения двух из них, контуром обведена зона роста мицелия, она еле заметна и на фото и при осмотре глазами:

И для примера фото чашки, где признаков ризоморфного мицелия нет. 

 

Эти наблюдения и размышления привели меня вот к какому выводу:

- После первых двух пересадок в чашках Петри мицелий рос 3 дня и на 4-й день останавливался.

- В банках с зерном происходило то же самое. Инокуляция - 3 дня хорошего роста - перетряска - 3 дня роста - остановка.

- Из 9-ти последних чашек Петри только в 3-х были небольшие сектора сильного мицелия. Выходит что в моем случае только малая часть посевного материала показала видимую силу и жажду жизни. 

- Значит и в банках есть жизнь, но она хилая, и в них может и не быть сильной и хорошо развивающийся жизни вовсе, ведь мультиспоровую инокуляцию иначе как лотереей не назовешь.

 

Да, возможно на начальном этапе я заварил слишком сухое зерно, и возможно я рано перетряхнул банки. Также возможно имело место быть бактериальное заражение. Но также проявились факты, указывающие на то, что дело не только в моих недочетах, но и в жизнеспособности самого спорового отпечатка.

 

Меня отпустили все беспокойства, я принял решение в банки больше не лезть, а только наблюдать. Ведь у меня появился запасной вариант - мицелий на агаре.

 

Вот так выглядят банки сейчас.

Две старые банки. Одной 17 дней (слева), другой 13 дней (справа, есть места более светлых зерен, да там есть немного мицелия)

Две новые банки, 4 дня от инокуляции зерном, тишина и покой. 

 

Глава II. Новая надежда.

 

День 15.

Целый день в голове только один вопрос. Почему же у меня на чашках Петри растет какой-то слабый и еле заметный мицелий, а в банках вообще тишина? Поискал в сети. Такое иногда случается, пишут бывалые. Почему - ответа нет.  Что делать - советов много, но ни одного с подтверждением, что из этого жиденького мицелия что-то толковое выросло. Написал продавцу спор, тот оперативно ответил, что у него такого с этим стрейном не случалось. Попалась несколько раз информация, что если после перетряхивания банок, мицелий перестает расти, то причиной может быть бактериальное заражение. Вечером, осматривая банки, я не обнаружил в них в них никаких изменений. Чего не скажешь о Т3 мицелии, что вчера был пересажен на новый агар. Вот фото 2-х из 12 чашек:

В остальных чашках та же активность. Т3 мицелий за сутки захватил весь кусочек агара, на котором его перенесли, и уже начал распространяться дальше. и это хорошо видимый мицелий.

А вот фото чашки с кусочком Т2 мицелия, который был перенесен 5 дней назад. Мицелий вокруг пересаженного кусочка еле видно, его границы я обвел.

 

 

 

 

День 16.

Т3 мицелий на агаре растет как надо.

Все банки с зерном были утилизированы, во время этого скорбного процесса присутствовал еле заметный кислый запах, который очень быстро перекрывался прекрасным грибным запахом. Очень похоже на бактериальное заражение. Банки были очищены и началась подготовка зерна для инокуляции мицелием с агара. За любимым зерном не поехал, в ближайшем магазине купил пшеницу для проращивания.

 

День 17.

Новые банки с зерном готовы , ждут инокуляцию. Мицелий на агаре еще нет, он растет, и тут есть на что посмотреть. Вернемся ко дню 14, когда я делал 3-й перенос мицелия с агара на агар. У меня было 3 чашки Петри, из которых я брал мицелий для переноса. Две чашки я сфотографировал, одна чашка , на мой взгляд самая не перспективная, осталась за кадром. Ниже два ряда фотографий. Первое фото каждого ряда - Т2 мицелий перед 3-м переносом, розовым обведена та область, которую я вырезал, поделил на 4 части и перенес в новые чашки. Четыре следующих фото каждого ряда - сегодняшние фотографии всех 4-х перенесенных кусочков.

    

-------

  

Обратите внимание, как перенесенный мицелий повторяет материнский. В трех чашках в каждой строке явно видна наследственность. Несмотря на то, какой сектор материнского мицелия вырезался, в его развитии наблюдается повторение развития материнского мицелия, с присутствием областей со слабым мицелием.

В первой строке последнее фото - лучший экземпляр, хороший и равномерный рост, ризоморфный мицелий, претендент на запуск с ним цикла и на консервацию для будущих циклов. Но внимание, верхняя половина области, отличается от нижней. Внизу мицелий более плотный. Именно нижний сектор подходит для дальнейшего переноса.

Во второй строке последнее фото - несмотря на достаточно равномерный рост, худший результат, потому что нет ризоморфного мицелия. дальнейший отбор точно не пройдет. 

 

День 18.

Мицелий в чашках Петри сегодня удивил своим ростом. Даже те, что остаются за кадром, сегодня показали себя так, что возможно примут участие в переносе на новый агар.  

Завтра намечена пересадка некоторых чашек и инокуляция банок с зерном мицелием с агара.

 

День19.

Вот такая  динамика роста мицелия на агаре. Разница между каждой фото в ряду около 24 часов. Последние фото в ряду сделаны сегодня, перед пересадкой и инокуляцией.

-----

-----

 

День 20.

Тишина после инокуляции мицелием с агара на зерно.

 

День 21.

Пока больше не буду рассказывать про то, что происходит в чашках Петри. Мицелий на агаре свою миссию выполнил. Он не дал раньше времени прекратиться циклу и утвердил меня не сдаваться, и любой ценой довести цикл до сбора урожая. 

Банки живут, в 2-х мицелий начал расти.

 

Глава III. Крахи надежд.

 

День 22.

Пока изменения видны только в первых двух банках. В двух банках за кадром мицелий развивается очень медленно, его рост еле заметен пока что только на кусочках агара.

 

День 23.

4-й день. после инокуляции банок агаром. Роковой день. Как уже было несколько раз, в этот день остановился рост мицелия в банках. Две из 4-х банок с момента инокуляции молчат. Сегодня одна из двух активных банок показала остановку роста мицелия. Это видно на общем фото и в третьей строке. Только одна банка с зерном продолжают развиваться.

 

Анализатор собственных действий уже кипит, занимаясь поиском ошибок.

 

День 24.

Сценарий повторяется. Полная остановка роста мицелия в банках. Анализатор собственных действий перегрелся и отключился. Все банки отправлены в утиль. Я склоняюсь к бактериальному заражению из-за некачественной стерилизации. За это время было подготовлено, инокулировано 9 банок, каждый раз я слегка менял пропорции зерна и воды. Не останавливаюсь и продолжаю совершенствоваться дальше. 

 

День 25.

Подготовка банок с зерном

 

День 26.

С новыми силами и новыми пропорциями зерна(пшеница) и воды я подготовил 5 банок (в деле уже и скороварка, и обычная кастрюля, то есть используются разные способы стерилизации и подготовки зерна) и инокулировал их мицелием с агара.

 

День 27-28.

Так вырос мицелий за последние 2 дня.

Вышел за пределы агара и тянется дальше. Так или иначе это заметно во всех 5-ти банках. Это лучший прогресс за этот цикл. Но натренированный нос чует признаки бактериального заражения.

 

Глава IV. Левел ап.

 

День 29.
Глубокое огорчение во мне. В инкубаторе запах прокисшего зерна постепенно усиливается. Я не стал дожидаться, когда я в очередной раз утилизирую все банки и сделал короткую вылазку за зерном. Я сменил поставщика зерна, увеличил время стерилизации, уже до неприличия увеличил время работы бактерицидной лампы в помещении, за время инокуляции вдохнул не больше десяти раз, понизил температуру в инкубаторе. Инокулировал мицелием с агара еще 6 банок. Больше чашек Петри с подходящим для инокуляции мицелием нет. Рассматривая предыдущие банки, я 2 из них убрал в карантинный инкубатор, В них рост мицелия уже приостановился и еще в одной мицелий начал тормозить. То есть две, а может и три, из пяти уже готовятся к отсеву. Короче говоря - океан огорчений. Но есть и приятные моменты. Может мицелий на зерне и не вырастит, и не будет продолжения его роста в субстратах, но то, как он растет на зерне и старается выжить, меня впечатляет.

На фото виден кусочек агара. После инокуляции и перетряски банки на нем почти не осталось мицелия. И как он вырос за 3 дня! И ведь этот рост происходит и в невидимой глазу глубине банки!

 

День 30.
Сегодня утилизировал четыре банки из предпоследней партии, одну пожалел, засомневался, что она заражена бактериями. То ли обоняние от кислого притупилось, то ли действительно я погорячился. Но раз я её открыл, то возвращать её я не захотел, так что решил замешать это зерно с субстратом и убрать в инкубатор. Будь что будет. Последняя из предыдущей партии банка продолжает радовать ростом мицелия.

4-й день после инокуляции, мицелий растет, роковой для меня рубеж пройден. Но расслабиться мне не дает зерно на дне этой банки, думаю, что там могут жить бактерии. Трясти банку не решаюсь. Посмотрю, как гифы пойдут ко дну...
Последняя партия инокулированных агаром банок развивается не так быстро, но там пока только плюсы: опасных запахов нет, мицелий неспеша растет.

 

День 31.
Единственная оставшаяся из предпоследней партии банка уже не так активно, но обрастает, верхняя половина банки захвачена полностью. Мицелий с трудом опускается вниз, очень беспокоюсь, что там засели бактерии.

Последняя партия банок пока молчит. Мицелий захватил полностью кусочки агара и очень нехотя перебирается на зерно, в каждой банке есть несколько точек инокуляции вне агара. В этот раз я сделал экстремально сухое зерно, буду наблюдать.

 

День 32.
Банка, что последние три дня была на фото, ушла с субстратом в контейнер. Во время этого волнительного процесса стоял прекрасный запах грибницы, но стоило приблизиться ко дну, как атмосфера наполнилась уже набившим оскомину запахом бактериального заражения. Плюс к этому, две банки из последней партии обрели этот же запах и были утилизированы.
Промежуточный итог текущего цикла:
- инокулировано 20 банок, 16 банок были заражены бактериями, 1 банка с подозрением на то же самое, 3 банки пока что показывают развитие только мицелия. В этих трех банках очень много точек инокуляции, даже на дне, что дает немного больше уверенности чем раньше в том, что бактерий в них нет.
- нет полной уверенности, но на уровне ощущений я нашел подходящий для себя способ подготовки зерна для инокуляции.
- спасая хорошие на вид банки с зерном, сделано два контейнера, которые пока что находятся в инкубаторе.
- получен огромный опыт в работе с агаром, чашками Петри и пересаживанием мицелия. К слову - сегодня из трех чашек с Ps. Cub. Burma пересадил мицелий в 15 новых это уже 5-й перенос с момента иноколяции спорами. Селекция продолжается.
- опираясь на свои собственные наблюдения, я заметил, что захват зерна мицелием с агара происходит быстрее, чем захват зерна спорами. Требуется больше повторений и сравнений, чтобы утвердиться в этом.
Не вижу причин в этом рассказе продолжать говорить о банках. Перехожу на следующий уровень.

 

День 33.
Итак, есть два контейнера в инкубаторе. Контейнеры обрастают по разному. Мицелий в первом контейнере (ему три дня) более пушистый и не спешит переходить с зерен на субстрат. Второq контейнер (ему один день) показывает другую картинку. Мицелий ризоморфный, не стал обрастать вокруг зерен и полез сразу на субстрат.

 

День 34-35.
В парнике 3 контейнера.
Первый (Контейнер I) (5 дней) - мицелием покрыты только зерна, на субстрат никак не переходит. Есть подозрение на бактериальное заражение, так как в контейнере зерно, которое я хотел выбросить, но почему-то пожалел.
Второй (Контейнер II) (3 дня) - растет, захватывает субстрат.
Третий (Контейнер III) (0 дней) - создан сегодня из двух небольших банок. Одна из них заросла на 100%, вторая на 70%.

 

День 36.
Контейнер I мицелий развивается очень медленно
Контейнер II мицелий почти захватил всю поверхность
Контейнер III мицелий пока растет на зернах

 

День 37.
Контейнер II почти зарос

 

и был засыпан покровным слоем

 

День 38-40.
Контейнер I - ушел в утиль. Зерно, что я использовал для этого контейнера, все же было с бактериями.
Контейнер II - через покровный слой пробивается мицелий. Пока только по бокам. Это говорит о том, что:
 - покровный слой неравномерный по толщине - в моем случае маловероятно.
 - покровный слой переувлажнен - очень может быть. Последнее опрыскивание пару дней назад было лишним.

Вечером я заметил, что не только по бокам стал пробираться мицелий.

 

Контейнер III - поверхность субстратного блока заросла полностью. Этот контейнер я засыпать покровным слоем не буду.

Парник переводится в режим плодоношения, обогрев выключен, минимальная вентиляция. Контейнер II перенесен в маленький инкубатор.

 

Глава 5. В ожидании чуда.

 

День 41-44.
В парнике организованы несильное проветривание, высокая влажность и температура 23-24°С
Контейнер III за последние 3 дня притормозил в росте и вот-вот появятся примордии.

Надо было на день, а то и два, раньше переводить на плодоношение.

 

 

День 45.

Контейнер III - примордий становится больше
Контейнер II - растет и радует.

 

 

День 46

Контейнер III в том же состоянии, формируются примордии
Контейнер II - тоже уже в парнике. Фомируются примордия. Вот динамика за последние 7 дней, гифка:

 

И...

О чудо! Грибы!

 

 

 

Продолжение следует...

Изменено 15 мая 2020 пользователем Hamsabala

[Usomaru]

 Отличное начало, бро.
Буду следить за твоим репортом. 
Где брал отпечаток, если не секрет?

[Hamsabala]

3 часа назад, Usomaru сказал:

 Отличное начало, бро.
Буду следить за твоим репортом. 

Дополнять репорт буду нечасто, "главами"

 

3 часа назад, Usomaru сказал:

Где брал отпечаток, если не секрет?

Не секрет. Приобретал у arendator-a

[CaHeKzzZZ]

@Hamsabala 

Возился я одно время с агаром, хорошо обрастают чашки, где нет налёта, этот самый налёт, это бактерии. Он появляется на второй или третий день и развивается очень быстро, можно даже не увидеть, если не заметил его появления, с виду нормальная чашка, а по факту полностью затянута матовой, еле заметной плёнкой. 

Удачи тебе бро! Интересное хобби.

[Hamsabala]

@CaHeKzzZZ , благодарю!

Сложно описать и не хватает мощности техники показать. Тот налет идет на несколько милиметров впереди пушка мицелия и он имеет "узор" мицелия.  Опыта с агаром у меня очень мало, но налет, о котором говоришь ты, я уже встречал.

[Hamsabala]

Сделал максимум, принес в жертву немного мицелия.

 

Этот экземпляр старее истории, что я пишу, и тут пушок уже достаточно сильно распространился. Но вот между нетронутым агаром и пушком есть тот самый налет.

[Hamsabala]

UPD

добавлена Глава II, день 15-21.

[Hamsabala]

 UPD

Добавлена Глава III, день 22-28.

[Hatarakimas]

В виду медленного  захвата мицелием зерна ( в отличии от споровой взвеси /жм ) так как очаг только там где лежит вырезанный кусочек мицелия , дабы предотвратить бактериалку не было ли мысли все таки добавлять антибиотик в субстрат ?  Меня возможно скоро это ждет думаю как поступить .

Мысль . А что если левика крошануть прям при замесе агара для чашек петри ?  . По логике грибы растут бактерии не растут ))) 

Изменено 15 апреля 2020 пользователем Hatarakimas

[Hamsabala]

@Hatarakimas я против применения антибиотиков, потому что это расслабляет и позволяет не соблюдать чистоту процессов.

[Hamsabala]

 UPD

Добавлена Глава IV, день 29-40.

[Hamsabala]

 UPD

Добавлена Глава V, день 41-46.

[Hamsabala]

День 47.
Контейнер II - грибочки растут
Контейнер III - никаких изменений уже 8 дней. Верхний слой мицелия за это время стал только плотнее. Субстратный блок отошел от стенок контейнера. Я его достал из контейнера, по бокам примордий тоже нет.

 

День 51.
Контейнер II

Завтра срезать, вуали рвутся. Вышли низкорослики. Полагаю, что я переборщил с освещением.

 

Контейнер III
Верх

 

Низ

 

Икона оверлея. Я специально не вмешивался в развитие этого блока, потому что хотел посмотреть, чем это закончится. Плодоношения нет. Я передержал контейнер на вегетации. И когда упала температура и заработал воздухообмен, было уже поздно. Мицелий стал уплотняться и перекрых всю поверхность. Примордия были но плодовые тела формироваться не стали. На день 47 я достал субстратный блок из контейнера, думая, что примордия смогут появиться по бокам или снизу блока. Они стали формироваться, но опять - дальнейшего роста нет. Пусть стоит, пока другой контейнер плодоносит.

[Hatarakimas]

С рождением гномов !) 

[Hamsabala]

@Hatarakimas 

Благодарю. Наконец я ощутил, что вернулся в тему

[Hamsabala]

Контейнер II отплодоносил. За две волны дал 15 грамм сухого веса и ушел на покой.